Работа №3. Микроскопическое строение крови (микропрепараты крови человека и лягушки)

Изучите при большом увеличении микроскопа микропрепарат крови человека. Найдите эритроциты, обратите внимание на их окраску, форму, строение. Передвигая препарат, отыщите лейкоциты разных видов и рассмотрите их цвет, форму ядра и рассмотрите их цвет, форму ядра. Зарисуйте 1-2 эритроцита и некоторые лейкоциты.

Изучите при малом увеличении микроскопа микропрепарат крови лягушки. Обратите внимание на размер и форму эритроцитов, на эозинофилы (лейкоциты с крупными ярко-красными гранулами и ядром, состоящим из 2-3 сегментов), на тромбоциты (очень мелкие ядерные клетки, чаще расположенные группами и поэтому напоминающие большую клетку с многочисленными ядрами). Зарисуйте тромбоциты и эритроциты.

Результаты наблюдений занесите в таблицу «Сравнительная характеристика строения эритроцитов человека и лягушки»

Сделайте вывод. Подумайте, чья кровь – человека или лягушки – способна перенести больше кислорода за единицу времени? Объясните, почему.

Окраска цитоплазмы крови человека

Оборудование и материалы: лабораторный микроскоп, гистологические препараты:
Мазок крови взрослого человека
Мазок крови лягушки
Мазок красного костного мозга

Лабораторная работа рассчитана на 2 аудиторных часа.

Ход работы:

1. Рассмотреть препарат 1. Мазок крови человека (рис. 2.4, 2.5). Окрашивание азуром П и эозином.
При малом увеличении обратить внимание на различную окраску эритроцитов и лейкоцитов. Эритроциты – самые многочисленные клетки крови и на мазке они составляют большинство.
При большом увеличении микроскопа найти эритроциты (рис. 2.4), окрашенные эозином в розовый цвет. Обратите внимание, у эритроцитов более интенсивно окрашена периферическая часть, а центральная область бледная. Связано это с тем, что эритроцит имеет форму двояковогнутого диска.
Найти в поле зрения нейтрофильный сегментоядерный лейкоцит (рис. 2.4). Цитоплазма нейтрофила имеет бледно сиреневую или голубую окраску, зернистая, содержит темные азурофильные гранулы, которые представляют собой первичные лизосомы. Ядро дольчатое (от 3 до 5 сегментов, соединенных тонкими «мостиками»), окрашено в фиолетовый цвет.
Найти на мазке эозинофильный лейкоцит (рис. 2.4). Ядро клетки обычно двудольчатое, а цитоплазма заполнена большими эозинофильными (темно-розовыми) специфическими гранулами одинакового размера.
Базофильные гранулоциты встречаются редко. Для них характерна крупная зернистость фиолетового цвета (рис. 2.4). Ядро базофила обычно почковидное, двудольчатое, часто его не заметно из-за обилия гранул и слабого окрашивания.
Найти в поле зрения лимфоцит и моноцит. Лимфоциты имеют округлое плотное ядро с узким ободком цитоплазмы (рис. 2.5). Моноциты легче найти на периферии мазка. Это крупные клетки с обширной цитоплазмой голубого цвета (рис. 2.6). Форма ядра подковообразная или двудольковая, окрашивается слабее, чем у лимфоцитов, поэтому в нем хорошо заметны ядрышки.
Кровяные пластинки небольшого размера (в 3 раза меньше эритроцитов), расположены небольшими группами между клетками и имеют слабо-фиолетовую окраску.
2. Зарисовать и обозначить: 1) эритроциты; 2) нейтрофильный сегментоядерный лейкоцит; 3) эозинофильный лейкоцит; 4) базофильный лейкоцит; 5) лимфоцит; 6) моноцит. Выделить в гранулоцитах ядро, цитоплазму, гранулы. В агранулоцитах обозначить ядро, цитоплазму.

3. Рассмотреть препарат 2. Мазок крови лягушки (рис. 2.7). Окрашивание азуром П и эозином.
В поле зрения видны ядерные эритроциты, характерные для всех классов позвоночных, исключая млекопитающих. Вместо кровяных пластинок в мазке крови лягушки видны тромбоциты – мелкие клетки, располагающиеся небольшими группами между другими клетками крови. Эритроциты имеют овальную форму. Цитоплазма их розового цвета. В центре клетки располагается овальное ядро темно-синего цвета.
Нейтрофилы мельче эритроцитов, гранулы в их цитоплазме палочковидной формы. Ядра сегментированные. Лимфоциты и моноциты существенных особенностей не имеют.
4. Зарисовать и обозначить: 1) эритроциты (выделить в них ядро, цитоплазму, плазмолемму); 2) нейтрофилы; 3) эозинофилы; 4) тромбоциты; 5) лимфоциты; 6) моноциты.

5. Рассмотреть препарат 3. Мазок красного костного мозга. Окраска по методу Романовского-Гимзы.
Мазок красного костного мозга (рис. 2.8. — 2.12) позволяет изучать в световом микроскопе различные стадии и виды гемопоэза, поскольку клетки после обработки антикоагулянтами и окраски располагаются не группами, а поодиночке и хорошо различимы.
6. Зарисовать и обозначить: 1) эритробласты (базофильные, полихроматофильные, оксифильные); 2) ретикулоциты; 3) эритроциты; 4) промиелоциты; 5) метамиелоциты; 6) палочкоядерные; 7) сегментоядерные гранулоциты (базофильные, нейтрофильные и эозинофильные); 8) промоноциты; 9) моноциты; 10) промегакариоциты; 11) мегакариоциты; 12) лимфоциты (большие, средние, малые).

Окраска цитоплазмы крови человека

Изучение форменных элементов крови

1. Особенности изучения темы «Кровь»
на практическом занятии по гистологии

Пособие составлено с учётом особенностей преподавания гистологии на очном и заочном отделениях факультета ветеринарной медицины НГАУ. В нем отражены вопросы, наиболее часто задаваемые студентами и вызывающие наибольшие затруднения.

К данным особенностям можно отнести следующее.

1. Изучение мазков крови человека, а не сельскохозяйственных животных . Это связано с наличием учебных препаратов «Мазок крови человека», которыми централизованно снабжались высшие учебные заведения. Кроме того, строение форменных элементов крови большинства видов сельскохозяйственных животных и человека имеет значительное сходство. Поэтому, в случае освоения навыков работы с препаратами крови человека, дальнейшая работа с мазками крови животных не вызовет затруднений.

2. Работа с препаратами, окрашенными гематоксилином и эозином. Данная особенность также связана с наличием учебных препаратов, окрашенных гематоксилином и эозином, а не по методу Романовского-Гимзы, по которому принято окрашивать мазки крови в диагностических лабораториях.

Препараты крови, окрашенные по методу Романовского-Гимзы, имеют некоторые отличия от препаратов, окрашенных гематоксилином и эозином. Общим для двух методов является окрашивание эритроцитов в розовый цвет, ядер лейкоцитов – в синий. Отличия касаются окраски цитоплазмы лейкоцитов: в первом случае она серо-голубая (чем больше РНК содержится в цитоплазме, тем больше преобладает синий цвет), во втором – розовая. Преимуществом окраски по методу Романовского-Гимзы является лучшее выявление зернистости в цитоплазме гранулоцитов. Однако навыки идентификации лейкоцитов, окрашенных гематоксилином и эозином, также необходимы морфологу, поскольку в большинстве гистологических исследований препараты окрашивают гематоксилином и эозином. Определение вида лейкоцитов в тканях в ходе гистологического исследования часто имеет диагностическое значение.

Помимо особенностей окраски, в гистологических препаратах форменные элементы крови имеют иную форму, поскольку они не распластаны на стекле, а находятся свободно либо бывают сдавлены окружающими структурами. На рис. 1-3 представлены ситуации, когда от выявления лейкоцитов определённого вида в исследуемых тканях зависит постановка диагноза.

Представленные в пособии фотографии выполнены с препаратов, окрашенных гематоксилином и эозином (за исключением рис. 21 и 40).

Рис. 1. Печень кролика при паразитарном поражении. В печени содержится большое количество лейкоцитов с яркими розовыми гранулами в цитоплазме

Рис. 2. Печень крысы при остром алкогольном гепатите. В центральной части фотографии видно скопление мелких тёмных клеток – лимфоцитов

Рис. 3. Лимфатический узел собаки при гнойном лимфадените. Препарат содержит множество сегментоядерных нейтрофильных гранулоцитов

3. Работа без иммерсии. Изучение морфологии форменных элементов крови рекомендуют проводить при 900-1500-кратном увеличении. Данное увеличение получают при помощи иммерсионных объективов. В диагностических лабораториях подсчёт лейкоцитарной формулы также выполняют с использованием иммерсионных объективов. На практических занятиях по гистологии микроскопированием с иммерсией пользуются редко, поскольку неполное удаление иммерсионного масла ведёт к порче объектива. Обычно на практических занятиях препараты рассматривают при помощи неиммерсионных объективов при 400-600-кратном увеличении. Данного увеличения вполне достаточно для уверенной идентификации клеток (в случае знания их морфологии). Кроме того, гистологические исследования, в ходе которых определяют виды лейкоцитов в тканях, также проводят без использования иммерсии.

Для увеличения сходства фотографий, представленных в пособии, с картиной, наблюдаемой в микроскоп на практическом занятии, все фотографии выполнены без иммерсии. Площадь препарата, представленная на фотографиях, примерно соответствует полю зрения учебного микроскопа. С этой же целью поля зрения выбраны случайным образом, кадрирования и улучшения качества изображений не проводилось, фотографии содержат изображения артефактов, имеющихся в учебных препаратах.

© Новосибирский государственный аграрный университет, 2011

© ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО Россельхозакадемии, 2011

Подписпна в печать 10.04.2011, Издат. №171 (УДК 619:611.018 (075); ББК 48.32, я 73; К 143)